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對玻片進(jìn)行染色是細(xì)胞學(xué)檢查中很重要的一步,如果染色不成功,會導(dǎo)致標(biāo)本模糊,無法進(jìn)行觀察。近幾年,細(xì)胞學(xué)作為一種診斷技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域越來越常見,許多醫(yī)師幾乎每天都要對血涂片或皮膚病灶或內(nèi)臟采集的細(xì)胞學(xué)樣本做染色。在玻片染色前要遵守的第一條規(guī)則就是不要讓未染色的玻片與福爾馬林蒸汽接觸,福爾馬林氣體會使染料無法滲透進(jìn)入細(xì)胞,導(dǎo)致顏色模糊,外觀褪色(圖1)。
羅曼諾夫斯基染色(瑞氏,吉姆薩)
大多數(shù)醫(yī)師都選擇快速羅曼諾夫斯基染料,這是一種最初由亞甲藍(lán)和伊紅配制成的多色染劑。染色步驟包括首先蘸取酒精固定劑(甲醇)以及連續(xù)浸潤于兩種染劑中,先是天青B(N,N,N,-三甲胺),這種基礎(chǔ)染料是亞甲藍(lán)的代謝產(chǎn)物;然后是伊紅Y(四溴熒光素),一種酸性染料。
這種染色方法要求玻片自然風(fēng)干,然后再蘸取酒精固定液。羅曼諾夫斯基染色法本是用于血液和骨髓抹片染色的,但是隨著時(shí)間推移和細(xì)胞學(xué)普及,這種方法有了更廣的應(yīng)用,可以對任何細(xì)胞學(xué)樣本染色。
初學(xué)者要注意,使用這種染色法時(shí)玻片上必須是薄薄的單層細(xì)胞樣本,如果樣本太厚則染劑無法正確進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
這種染色技術(shù)簡單快捷:玻片必須風(fēng)干和浸入上述三種溶液中。沒有規(guī)定每次需要多少滴染劑或浸潤多久,具體取決于染劑的使用情況以及它們過濾或更換的頻率。一般來說,每種染劑多少滴取決于固定劑和染料需要多長時(shí)間才能浸潤細(xì)胞。每種染劑3-4滴保持1-2s一般即可成功染色。隨著時(shí)間推移,操作技術(shù)會逐漸變得爐火純青。
當(dāng)透明的醋酸膠帶一定要染色時(shí)羅曼諾夫斯基染色也是很有用的。有些膠帶質(zhì)量差所以進(jìn)入固定液時(shí)會卷曲或模糊。單獨(dú)用第二種染劑(藍(lán)色)或其他染劑比如乳酚藍(lán)或結(jié)晶紫有可能獲得較好的染色效果。只要在膠帶粘有細(xì)胞的底面滴幾滴染料就足夠沉淀。在顯微鏡觀察涂片之前,要用吸水紙吸走多余的染料,否則難以看清細(xì)胞細(xì)節(jié)。
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